Detection of fetal erythroid cells from maternal blood using fluorescence in situ hybridization and liquid culture

Fetal nucleated erythrocytes circulating in maternal blood are a potential source of fetal DNA for noninvasive prenatal genetic diagnosis. However, the estimated ratio of fetal to maternal cells is extremely small. In order to enrich these cells, we performed direct culture using a two-phase liquid system. Mononuclear cells were obtained from maternal blood samples at 8-10(+3) weeks of gestation and cultured in the first phase. After 4-5 days, the nonadherent cells were harvested and recultured with erythropoietin in the second phase for another 3-5 days. We examined cellular morphology, and counted the number of benzidine- positive cells and the percentage of glycophorin A/CD71 positive erythroid cells. We also did Kleihauer-Betke stain for Hb F, polymerase chain reaction (PCR) for SRY/DYZ1, chromosome analysis, and fluorescence in situ hybridization (FISH). The number of total erythroid cells reached about 0.1x10(6)-1.0x10(6)/mL with a purity of 84.0-97.3%. Hb F stain showed total erythroid cells of approximately 0.4x10(4)-9.8x10(4)/mL. Male DNA was detected in one case by PCR. In this case, the XY karyotype was confirmed by FISH and amniocentesis. This approach provides enriched source of fetal cells for further prenatal genetic analysis without complicated separation or sorting procedures.

Marcadores bioquímicos para la detección de cromosopatías y defectos del cierre del tubo neural en el feto / Biochemical markers for chromosopathies detection and defects in fetal neural tube closure

Aunque las malformaciones congénitas, las enfermedades cromosómicas y hereditarias son de presentación infrecuente, en forma conjunta contribuyen a una porción significativa de la morbimortalidad perinatal e infantil. La alfa fetoproteína (AFP) fue el primer marcador bioquímico de anomalías cromosómicas o estructuras fetales, identificado en sangre materna. Utilizada entre las semanas 16 y 20 de gestación, y tomando un punto de corte de 2MoM (múltiplos de la mediana para cada edad gestacional) la tasa de detección para anencefalia fue de 93 por ciento, y para espina bífida 85 por ciento con una tasa de falsos positivos de 8 por ciento. El descubrimiento de nuevos marcadores: estriol no congugado (uE3), la beta subunidad de la hormona gonadotrofina coriónica humana (b hCG), y la inhibina A, permitieron una mejora en las tasas de detección. La utilización de marcadores múltiples en el segundo trimestre permite una detección del 60-70 por ciento de los fetos afectados con una trisomía 21 con una tasa de falsos positivos del 5 por ciento; y permite además la detección del 98 por ciento de los defectos abiertos del cierre del tubo neural. Recientemente se han hallado marcadores bioquímicos (fracción libre de la b h CG y PAPP A-pregnancy associated plasma protein A) y ecográficos (pliegue nucal) útiles en el primer trimestre (11-13 semanas), cuyo uso conjunto permiten, en algunos centros, una detección de hasta un 90 por ciento de los casos. Todo programa de screening prenatal debe poseer la capacidad de disminuir la morbilidad y la mortalidad, permitiendo el acceso al diagnóstico prenatal y estimulando en las parejas la capacidad de tomar decisiones informadas sobre su reproducción así como diseñar estrategias adecuadas para el seguimiento del embarazo y el parto

Estudio preconcepcional en un heterocigota de translocación t(1;4) (p32;q25): análisis de segregación y aneuploidia por FISH doble y triple color / Preconceptional study in a heterozygote of traslocation t(1;4) (p32;q25): segregation analysis and aneuploidy by double and triple color FISH

Introducción: Los reordenamientos cromosómicos equilibrados se asocian con infertilidad debido a que los portadores producen gametas con desequilibrios cromosómicos, que conducen a concepciones anormales, lascuales pueden ser letales o dar lugar a nacidos malformados. Objetivos: Evaluar la segregación del cuadrivalente meiótico y el posible efecto intercromosómico del mismo. Pacientes y Métodos: Consulta para ingresar a nuestro programa de Diagnóstico Genético Preimplantatorio (DGP) una pareja con antecedentes de cuatro abortos espontáneos, dos de ellos con estudio crosómico anormal. La mujer con cariotipo normal y el varón 46,XY,t(1;4) (p32;q25). Antes de acceder al DGP decidimos estudiar a los espermatozoides para analizar la segregación del cuadrivalente con sondas, que a posteriori serían usadas en el DGP, y además evaluar el efecto intercromosómico sobre los cromosomas 13, 18, 21 y cromosomas sexuales. Los estudios se relizaron sobre extendidos de espermatozoides previamente decondensados. Se usaron para realizar FISH las siguientes mezclas de sondas: A) dos centroméricas de los cromosomas 1 y 4,y una telomérica 4q. B) Tres centroméricas de los cromosomas 18 X e Y. C) Dos loci específicas de los cromosomas 13 y 21. Se analizaron aproximadamente 1000 espermatozoides para cada mezcla de sondas utilizadas, registrándose los patrones de segregación del cuadrivalente meiótico con las sondas centroméricas 1 y 4 y la telomérica 4q, y las nulisomías, disomías y diploidías con las sondas de los cromosomas 13, 18, 21 y crosomas sexuales. Resultados: Las frecuencias de los patrones de segregación alternada, adyacente I, adyacente II y 3:1 fueron: 24.0 por ciento, 26.4 por ciento, 11.4 por ciento y 38.2 por ciento, respectivamente. Las frecuencias de aneuploidía de los crosomas 13, 18, 21 y par sexual fueron: 21.5 por ciento, 15.2 por ciento, 31.0 por ciento y 28.2 por ciento, respectivamente. Además se encontró una frecuencia de espermatozoides presumiblemente disploides de 11.2 por ciento. Conclusiones: Teniendo en cuenta los resultados obtenidos en el futuro DGP no sólo se deberían estudiar a los cromosomas involucrados en la translocación, sino también a los correspondientes a las aneuploidías viables más frecuentes, debido al efecto intercromosómico demostrado

Trisomy 4p and partial monosomy 18q due to paternal translocation t(4;18) (p11; q21.3).

A carrier status for balanced translocation in either of the parents increases the risk of congenital malformation in the offspring. A case of multiple congenital anomalies in a female newborn was found to be associated with trisomy 4p and partial monosomy 18q as a result of a reciprocal translocation, t(4; 18) (p11; q21.3) in the father. The clinical and cytogenetic findings are compared with characteristic features of trisomy 4p, monosomy 18q and two similar cases reported earlier.

Investigation of sex chromosome abnormalities in teratozoospermia of infertile men using fluorescence in situ hybridization.

Fluorescence in situ hybridization is a fast and efficient method of investigating chromosomal abnormalities in human spermatozoa. In this study, we have established the frequency of sex chromosome disomy (XX, XY and YY) in teratozoospermia (98-100% abnormal morphology) of infertile men compared with normospermic men using double-probe FISH procedures. A total of 40,000 sperms were scored in each group of semen for chromosome X and Y with overall hybridization efficiency of 97.00 per cent and 98.02 per cent in infertile men and normal men, respectively. It was found that the frequency of disomy XX, XY and YY was significantly higher in infertile men compared with normal men (P < 0.05). It is concluded that the infertile men showed increased frequencies of sex chromosomal abnormalities.

A compreensao de informacoes por gestantes durante o aconselhamento genetico / Information understanding by pregnant women during genetic counseling

A ocorrencia de problemas geneticos fetais na gestacao e fonte de preocupacao. A consulta de aconselhamento genetico (A.G) e uma das etapas de atendimento da gestante considerada de alto risco para ocorrencia de sindromes geneticas...

Sindrome de Van der Knaap: megalencefalia com leucodistrofia: a respeito de dois casos na mesma família / Van Der Knaap syndrome: megalencephaly with leukodystrophy: report of 2 cases in the same family

Relatamos os casos de dois irmãos, com quatro e seis anos de idade, com achados característicos da síndrome de Van Der Knaap. Discutimos os seus aspectos clínicos e radiológicos, assim como suas peculiaridades. Comparamos aos dados da literatura e analisamos os possíveis mecanismos etiopatogênicos envolvidos.

Importancia da genética no serviço público: relato da extinçao de um setor de genética no Município de Sao Paulo, Brasil / The importance of genetics in the public health care system: report on the closing down of a genetics division in Sao Paulo (SP), Brazil

A disponibilidade de um serviço de genética em hospitais deveria ser uma questao de interesse público. A genética pode abreviar o período gasto na formulaçao de diagnósticos, reduzir o tempo médio de internaçao, antecipar a escolha de tratamentos adequados, impedir ou minimizar possíveis sequelas e, desta forma, reduzir os custos. O objetivo do presente estudo foi descrever o fechamento, em 1996, do setor de genética do Hospital Infantil Menino Jesus, de Sao Paulo, SP, Brasil. Realizou-se uma análise retrospectiva do trabalho desenvolvido naquele setor entre 1992 e 1996, com ênfase na detecçao de anormalidades cromossômicas. De todos os casos avaliados no período, 571 foram codificados em banco de dados. Alguma anormalidade cromossômica foi observada em 20 por cento dos 350 cariótipos realizados. A presença de um serviço de genética em hospitais minimiza o surgimento de manifestaçoes clínicas em portadores de distúrbios genéticos, melhora a qualidade de vida deses pacientes e permite que eles recebam informaçao sobre o risco de recorrência, além de evitar desperdícios decorrentes da realizaçao inadequada de exames caros. Tais benefícios justificam o investimento necessário para que este tipo de serviço funcione

Sindrome de Pallister Killian ou tetrassomia do braco curto do cromossomo 12 em mosaico : relato de dois casos diagnosticados pela hibridizacao in situ por fluorescencia (FISH) / Pallister Killian syndrome or tetrasomy of the short arm of the chromosome 12 mosaicism : report on two cases diagnosed by fluorescense in situ hybridization

A sindrome de Pallister Killian (SPK) e uma doenca rara caracterizada por multiplas malformacoes, retardo mental profundo e presenca de um isocromossomo...

Traslucencia nucal fetal, un marcador de alteraciones cromosómicas en el primer trimestre / Fetal nuchal translucency, marker of chromosome

Objetivo: Se evalúa la efectividad de la medición de la translucencia nucal en un examen de ultrasonido rutinario para la detección prenatal de síndrome de Down. Material y métodos: Estudio ecográfico entre las 10 y 14 semanas de edad gestacional para medición de la translucencia nucal, a fin de determinar la asociación de incremento de la translucencia nucal y un cariotipo fetal anormal. Resultados: Un total de 423 pacientes únicas y un embarazo gemelar fueron estudiadas. Hubo 410 fetos con valores de 3 mm o menos, de los cuales nacieron 409 productos normales y un feto con trisomía 13. De un total de 14 fetos con valores mayores de 3 mm de translucencia nucal encontramos 3 bebes normales, 7 bebes con trisomía 21, dos bebes con síndrome de Turney y 2 muertes fetales intrauterinas sin estudio genético. Se realizó 64 amniocentesis para cultivo de células fetales, 5 estudios cromosómicos en productos abortados espontáneamente y un estudio a un bebe nacido vivo con malformaciones. Conclusión: Este estudio demuestra que la medición de la translucencia nucal en el primer trimestre es un método efectivo de despistaje de anomalías cromosómicas fetales y que es posible la implementación de un programa de screening en la práctica rutinaria.

Acerca das anormalidades cromossomicas / Chromosome abnormalities

As anormalidades cromossomicas constituem causas importantes de perda reprodutiva, malformacoes congenitas e retardo mental, alem de contribuirem de forma importante na morbi-mortalidade perinatal. Aproximadamente 15 porcento das gestacoes clinicamente reconhecidas na populacao terminam em aborto espontaneo e...

Avaliaçäo de famílias submetidas ao diagnóstico pré-natal citogenético / Evaluation of families submitted to cytogenetic prenatal diagnosis

OBJETIVOS: avaliar a aceitaçäo dos métodos de diagnóstico pré-natal citogenético utilizados e determinar o envolvimento emocional dos pais com a gestaçäo e a intençäo dos mesmos de interromper ou näo a gravidez, caso o diagnóstico pré-natal citogenético (DPC) detectasse alguma anomalia cromossômica fetal. CASUíSTICA E METODOLOGIA: estudamos 44 gestantes que se submeteram ao DPC através de questionários auto-administrados. RESULTADOS: somente um caso de alto risco fez parte deste estudo (translocaçäo paterna balanceada). Foi detectado um caso de síndrome de Down e esta gestaçäo foi intencionalmente interrompida. O planejamento da gestaçäo foi observado, principalmente, nos pais que já tinham tido um filho afetado. Nossa amostra foi constituída quase totalmente por católicos e observamos a intençäo de induzir aborto, caso o diagnóstico pré-natal citogenético detectasse alguma anomalia cromossômica fetal na grande maioria dos participantes. CONCLUSõES: a aceitaçäo dos métodos de DPC utilizados foi unânime, demonstrada inclusive pela intençäo de repetir o procedimento, caso engravidassem novamente. O envolvimento emocional com a gestaçäo foi observado na maioria das gestantes, assim como a intençäo de interromper a gestaçäo, caso o DPC detectasse alguma anomalia cromossômica fetal, nos permitindo sugerir um apoio psicológico e, ainda, uma revisäo nas leis brasileiras sobre o aborto, nos casos em que o dignóstico pré-natal detecte anomalias físicas ou mentais nos fetos estudados.

Clonal chromosome abnormalites found in three non-neoplastic proliferative brain lesions

Chromosome analysis was made of brain lesions from three patients which, according to classical histopathological criteria, did not contain tumor cells. In addition to normal cells, we identified abnormal karyotypes with clonal numerical and structural chromosome alterations in at least two independently originated primary cultures from each lesion. Our data suggest that chromosomal aberrations can exist in vivo in non-neoplastic lesions. Other abnormalities may be due to genetic instability manifested only in vitro (culture artifacts) or may already have been present in brain tissue, reflecting previous chromosome damage (as a result of exposure to chemical treatment or enviromental clastogens).